EGFR T790M और C797S के लिए डिजिटल पीसीआरः TKI थेरेपी के बाद अनुक्रमिक प्रतिरोध का पता लगाना

अवलोकन

ईजीएफआर-निर्देशित चिकित्सा के प्रतिरोध एक अनुमानित क्रम में आता है, और यह परीक्षण उस अनुक्रम के आसपास बनाया गया है।जबकि C797S तीसरी पीढ़ी के एजेंट T790M के खिलाफ तैनात किया गया है के बाद दिखाई देता है. एक अत्यधिक संवेदनशील प्रतिक्रिया में दोनों प्रतिस्थापनों को लक्षित करने से प्रगति की अस्पष्ट नैदानिक छाप एक नामित भागने की तंत्र में बदल जाती है.

यह कैसे काम करता है

डिजिटल पीसीआर प्रवर्धन शुरू होने से पहले कई हजार स्वतंत्र विभाजनों में एक एकल तैयार नमूने को विभाजित करता है। प्रत्येक विभाजन में या तो एक लक्ष्य अणु होता है या नहीं होता है,तो चक्र के बाद उपकरण सकारात्मक डिब्बों गिनती और एक मानक वक्र के संदर्भ के बिना एक पूर्ण अणुओं की गिनती प्राप्त करने के लिए पोइसन के आंकड़े लागू करता है. एलील-विशिष्ट जांच प्रचुर मात्रा में जंगली प्रकार की पृष्ठभूमि से उत्परिवर्ती अनुक्रम को अलग करती है। यह विभाजन एक दुर्लभ प्रतिरोध एलील को भारी सामान्य डीएनए के खिलाफ बुलाया जाने की अनुमति देता है,जो मायने रखता है क्योंकि भागने क्लोन अक्सर एक छोटे से अंश का प्रतिनिधित्व करते हैं परिसंचारी सामग्री के क्षण में प्रगति नैदानिक रूप से दिखाई देने लगती है.

संकेत

यह परीक्षण उन रोगियों के लिए उपयुक्त है जो ईजीएफआर-निर्देशित उपचार पर प्रगति कर रहे हैं जहां अगली पंक्ति चुनने से पहले भागने की तंत्र का नाम दिया जाना चाहिए।और ऊतक का उपयोग किया जा सकता है जहां एक ताजा नमूना प्राप्त किया जा सकता हैयह उपचार के दौरान सीरियल नमूनाकरण का भी समर्थन करता है, क्योंकि एक पूर्ण गणना एक एकल स्नैपशॉट के बजाय ड्रॉ के बीच तुलना की अनुमति देती है। एक नकारात्मक प्लाज्मा परिणाम प्रतिरोध को बाहर नहीं करता है,क्योंकि बहाव भिन्न होता है, इसलिए क्लिनिकल तस्वीर असहमत होने पर ऊतक पुष्टि उचित बनी रहती है।

विनिर्देश और रिपोर्टिंग

आवश्यक रक्त मात्रा की पुष्टि करें, उत्परिवर्ती एलील अंश के रूप में व्यक्त पता लगाने की सीमा, और प्रति प्रतिक्रिया पूछताछ की गई डीएनए प्रतियों की संख्या, क्योंकि एक कम इनपुट चुपचाप संवेदनशीलता को कम करता है।रिपोर्ट में अंश के साथ-साथ पूर्ण उत्परिवर्तित और जंगली प्रकार की गिनती दी जानी चाहिए, प्रत्येक प्रतिस्थापन का अलग से नाम दें और रिकॉर्ड करें कि इनपुट मान्य सीमा से नीचे गिर गया है या नहीं।

भंडारण और आपूर्ति

प्लाज्मा कार्य घड़ी द्वारा शासित होता है। मानक ईडीटीए नलिकाओं में लिया गया रक्त एक छोटी परिभाषित खिड़की के भीतर पृथक्करण तक पहुंचना चाहिए, परिवहन के दौरान 2-8 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है,चूंकि ल्यूकोसाइट टूटने जंगली प्रकार के डीएनए के साथ नमूना बाढ़ और सिग्नल दफनकोशिका स्थिरीकरण नलिकाएं उस खिड़की का विस्तार करती हैं और विखण्डित संग्रह नेटवर्क में अपने प्रीमियम के लायक हैं। अलग प्लाज्मा को जमे हुए संग्रहीत किया जाता है।लिखित कुरिअर कार्यक्रम और प्रलेखित खींचने-से-अलग करने के अंतराल किसी भी ऊतक आधारित परीक्षण की तुलना में यहां अधिक मायने रखते हैं.

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

प्रश्न: जब प्रतिरोध का संदेह होता है तो व्यापक अनुक्रमण पैनल पर डिजिटल पीसीआर क्यों चुनें?जब प्रश्न यह है कि क्या एक ज्ञात प्रतिस्थापन मौजूद है, विभाजन गिनती एक कम पता लगाने की सीमा तक पहुंचती है और व्यापक अनुक्रमण की तुलना में तेजी से लौटती है।एक व्यापक पैनल के बजाय चुनें जब भागने का मार्ग वास्तव में अज्ञात है.

प्रश्न: C797S का पता लगाने से चिकित्सा की अगली पंक्ति के लिए क्या संकेत मिलता है?यह दर्शाता है कि तीसरी पीढ़ी के अवरोधकों द्वारा लक्षित बंधन स्थल पर भागने का घटनाक्रम हुआ है, इसलिए उसी एजेंट को जारी रखने से मदद मिलने की संभावना नहीं है।इस परिणाम पर वर्तमान उपचार मार्गदर्शन के आधार पर चर्चा की जानी चाहिए, न कि इसे निर्धारित निर्देश के रूप में माना जाना चाहिए।.

प्रश्न: डीएनए का उपयोग करने योग्य होने के लिए प्लाज्मा को कितनी तेजी से प्रयोगशाला में पहुंचना चाहिए?मानक ईडीटीए संग्रह के साथ, खींचने से अलग करने का अंतराल घंटों में मापा जाता है, दिनों में नहीं।प्रदाता के निर्दिष्ट विंडो की पुष्टि करें और कार्यप्रवाह के लिए संग्रह साइटों को प्रतिबद्ध करने से पहले इसके खिलाफ अपने कूरियर को मान्य करें.